Tez No	İndirme	Tez Künye	Durumu
418638		Microscopic analysis of aneuploidy induced by the mutation of the CCDC124 gene / CCDC124 gen mutasyon sonucunda oluşan anöplyıdının mikroskopik analizi Yazar:ASMA AL-MURTADHA Danışman: PROF. DR. MEHMET BATU ERMAN Yer Bilgisi: Sabancı Üniversitesi / Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı Konu:Biyoloji = Biology ; Biyomühendislik = Bioengineering Dizin:DNA mutasyon analizi = DNA mutational analysis ; Mikroskopi-ışık = Microscopy-polarization	Onaylandı Yüksek Lisans İngilizce 2015 93 s.
Hücre siklusunun sitokinez aşamasında çift kıvrımlı bölge içeren, "coiled coil domain containing" protein 124 (Ccdc124) sentromer bölgesinden midbody bölgesine taşınmaktadır. Midbody bölgesinde mitoz sonrası oluşan iki yavru hücrenin birbirinden ayrılması için hücreler arası köprünün koparılmasına sitokinetik kesilme (abscission) adı verilmektedir. HEK293T hücrelerinde CRISPR/Cas9 genom mühendisliği sonrasında Ccdc124 geninin mutasyonu sitokinez bozukluğuna ve anöplyidik çok çekirdekli ("MN") hücrelerin oluşmasına neden olmaktadır. Bu çalışmada bu MN hücreler akım sitometre, konfokal mikroskopik görüntüleme sistemleri ve kantitatif görüntü analizi ile çalışılmıştır. MN hücreleri mitotik ve kromozomal bağlanma bozuklukları, çoklu sentrozomlar ve mikro-çekirdekler içermektedir. Bu bozuklukların kanser hücrelerinde de sıklıkla görünmesi, Ccdc124 proteinini kanser ile ilişkilendirmektedir. MN hücrelerinin 53BP1 proteini içeren fokus sayılarında artış gözlemlememiz, Ccdc124 mutant hücrelerde DNA hasar yolaklarının ve p53 yolaklarının aktive olduğunu belirtmektedir. MN hücreleri buna bağımlı olarak p53 protein miktarını arttırmış ve p53 sinyalleri sonucunda ihtiyarlamış hücre tipine bürünmüşlerdir. Bu çalışma, Ccdc124 gen mutasyonu ile sitokinez bozuklukları ve p53 bağımlı hücre ihtiyarlaması arasında bir bağ kurmuştur.
The Coiled-coil domain containing protein 124 (Ccdc124) is a centrosomal protein that relocates to the midbody region at the cytokinesis stage of the cell cycle. Cytokinetic abscission is the cellular process that leads to physical separation of two postmitotic sister cells by severing the intercellular bridge. Mutation of the Ccdc124 gene by CRISPR/Cas9 genome editing in HEK293T cells leads to the failure of cytokinesis and formation of aneuploid (multinucleated-MN) aberrant cells. In this study, the MN cells were analyzed using flow cytometry and confocal imaging followed by quantitative image analysis. MN cells had mitotic and chromosome attachment aberrations, multiple centrosomes and micronuclei. These aberrations are known to occur in tumour cells, a finding that links Ccdc124 to cancer. MN cells also upregulated the p53 protein, which induced senescence. Furthermore, MN cells had increased numbers of 53BP1 foci which indicates that the mutation of Ccdc124 induces the DNA damage response and activates the p53 pathway. This study documents a relationship between Ccdc124 mutation-associated cytokinesis failure and p53-dependent senescence.