Tez No	İndirme	Tez Künye	Durumu
339907		Detecting g-protein coupled receptor interactions using enhanced green fluorescent protein reassembly / Geliştirmiş yeşil floresan proteinin yeniden birleşmesi kullanılarak g proteine kenetli reseptörlerin eşleşmesinin tespiti Yazar:GÖZDE KUMAŞ Danışman: YRD. DOÇ. DR. ÇAGDAS DEVRİM SON ; YRD. DOÇ. DR. TÜLİN YANIK Yer Bilgisi: Orta Doğu Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Bölümü Konu:Biyokimya = Biochemistry ; Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology Dizin:	Onaylandı Yüksek Lisans İngilizce 2012 115 s.
Memeli genomunda en geniş sınıfı kapsayan hücre yüzeyi reseptörleri olan G proteinine kenetli reseptör (GPKR) süperfamilyası hormon,feromon, koku ve nörotransmiter gibi çok sayıda hücre dışı faktör tarafından aktive edilmektedir. Birçok hastalık üzerinde tedavi edici etkisi olan ilaçlar GPKRL'lere etki etmektedir. Geleneksel düşüncenin aksine, son zamanlarda G proteinine kenetli reseptörlerin homo- ve hetero-dimerler oluşturduğu ve bu etkileşimin, reseptörün olgunlaşması, internalizasyonu, fonksiyonu ve/veya farmakolojisi üzerinde etkili olduğu kabul edilmektedir.Biyomoleküler floresan tamamlama tekniği (BIFC); protein parçalarının tekrar bir araya gelmesine dayanarak moleküller arası etkileşimleri doğrudan gösteren yenilikçi bir yaklaşımdır. Çalışmamızda bu teknik, maya hücrelerinde GPKR etkileşimlerini belirlemek ve görüntülemek için kullanılmıştır. Geliştirilmiş yeşil floresan proteini floresan özelliği olmayan iki parçaya bölünerek test edilecek olan proteinlere eklenmiştir. İki hedef reseptör arasındaki etkileşim, bu çalışma için Saccharomyces cerevisiae'da alfa feromon reseptörü olan Ste2p, floresan protein parçalarının birbirine yaklaşarak yeniden bir araya gelmelerini sağlar. Geliştirilmiş yeşil floresan proteininin birleşmesiyle kazanılan floresan özellik, etkileşimin doğrudan belirlenmesini mümkün kılar.Etkileşimin hücre içi lokalizasyonunun belirlenmesi için ileride yapılacak çalışmalara gerek duyulmaktadır. Ayrıca bu çalışmada oluşturulmuş olan birleştirilmiş protein partnerleri kullanılarak agonist/antagonist bağlanması ve fosforilasyon, glikozilasyon gibi translasyon sonrası modifikasyonlar belirlenebilir. Bunların dışında, BIFC tekniği için optimize edilen koşullar yeni protein-protein etkileşimlerini ortaya çıkarmak için kolaylık sağlayacaktır.
The largest class of cell surface receptors in mammalian genomes is the superfamily of G protein-coupled receptors (GPCRs) which are activated by a wide range of extracellular responses such as hormones, pheromones, odorants, and neurotransmitters. Drugs which have therapeutic effects on a wide range of diseases are act on GPCRs. In contrast to traditional idea, it is recently getting accepted that G-protein coupled receptors can form homo- and hetero-dimers and this interaction could have important role on maturation, internalization, function or/and pharmacology.Bimolecular fluorescence complementation technique (BiFC); is an innovative approach based on the reassembly of protein fragments which directly report interactions. In our study we implemented this technique for detecting and visualizing the GPCR interactions in yeast cells. The enhanced green fluorescent protein (EGFP) fractionated into two fragments at genetic level which does not possess fluorescent function. The target proteins which are going to be tested in terms of interaction are modified with the non-functional fragments, to produce the fusion proteins. The interaction between two target proteins, in this study Ste2p receptors which are alpha pheromone receptors from Saccharomyces cerevisiae, enable the fragments to come in a close proximity and reassemble. After reassembly, EGFP regains its fluorescent function which provides a direct read-out for the detection of interaction.Further studies are required to determine subcellular localization of the interaction. Moreover, by using the fusion protein partners constructed in this study, effects of agonist/antagonist binding and post-translational modifications such as glycosylation and phosphorylation can be examined. Apart from all, optimized conditions for BiFC technique will guide for revealing new protein-protein interactions.