Tez No	İndirme	Tez Künye	Durumu
285657		Development and investigation of etoposide resistance in MCF-7 breast cancer cell line / MCF-7 meme kanseri hücre hattında etoposit direncinin geliştirilmesi ve incelenmesi Yazar:ESRA KAPLAN Danışman: PROF. DR. UFUK GÜNDÜZ Yer Bilgisi: Orta Doğu Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Bölümü Konu:Biyoloji = Biology Dizin:	Onaylandı Yüksek Lisans İngilizce 2010 116 s.
Kemoterapideki başlıca sorunlardan biri kanser hastalarında ilaç dirençliliğinin gelişmesi nedeniyle tedavinin başarıya ulaşamamasıdır. DNA tamir mekanizmalarının ve ilaç hedeflerinin değiştirilmesi, topoizomeraz inhibitörleri etoposit ve doksorubisine karşı geliştirilen önemli direnç mekanizmalarındandır. Meme kanserinde topoizomeraz II inhibitörlerine karşı geliştirilen dirençlilikten dolayı hatalı eşleşme tamir (HET) genlerinin ifade düzeylerinde farklılıklar görülmektedir.Bu çalışmada, MCF7 meme kanseri hücre hattından (MCF7/S) etoposide dirençli alt hücre hatları geliştirilmiş, TOP2A ile iki önemli HET geni MSH2 ve MLH1'in ifade düzeyleri gerçek zamanlı PZR kullanılarak incelenmiştir. Karşılaştırma amacıyla, önceden geliştirilmiş olan doksorubisine dirençli hücreler de incelenmiştir. Etoposide dirençli MCF7/1000E, MCF7/1250E ve MCF7/2000E hücre hatlarının, ana hücre hattına göre sırasıyla yaklaşık 2, 3 ve 4 kat dirençli olduğu bulunmuştur. Hem etoposite hem de doksorubisine karşı dirençli hatlarda MLH1, MSH2 ve TOP2A ifade düzeyleri MCF7/S hücrelerine göre düşmüştür. Dirençli hücre hatlarında TOP2A ifade düzeyleri ana hücre hattındakine göre yüzde 10-95 arasında değişmektedir. MCF7/200E, MCF7/500E, MCF7/750E ve MCF7/1000E alt hücre hatlarında TOP2A gen ifadesinde düzenli bir azalma belirlenmiştir. MCF7/1250E ve MCF7/2000E alt hücre hatlarında gen ifade düzeylerinde dalgalanmalar görülmüştür. Doksorubisine dirençli hücre hatları (MCF7/600D ve MCF7/1000D) arasında, doksorubisine daha dirençli olan MCF7/1000D hücrelerinde TOP2A geninin ifadesi daha yüksek bulunmuştur. MSH2 ifade düzeyleri dirençlilik arttıkça düzenli olarak azalmıştır. Ancak MCF7/1250E alt hücre hattında MCF7/1000E alt hücre hattına göre anlamlı bir artış görülmüştür. MCF7/2000E hücrelerinde MSH2 ifade düzeyleri yine anlamlı bir şekilde ana hücre hattındaki düzeylerin yüzde 41'ine düşmüştür. MLH1 ifade düzeylerinin etoposite dirençli bütün alt hücre hatlarında ana hücre hattına göre anlamlı olarak (yüzde 18-58) azalmıştır. Doksorubisine dirençli hücre hatlarında, MCF7/1000D'de MLH1 ifadesinde azalma görülmüştür.Buna göre, TOP2A, MSH2 ve MLH1 genlerinin ifade düzeylerinin paralel olarak azalmasından bu genlerin dirençliliğe ortak olarak katkıda bulunduğu sonucu çıkarılabilmektedir. Belli bir dirençlilik seviyesinin üzerinde, hücrelerin daha yüksek dirençliliğin kazanılması için yeni stratejiler geliştirdiği düşünülmektedir. Dirençlilik mekanizmalarından birisi yeterli olmadığında, yeni stratejiler ortaya çıkmaktadır. Bu nedenle, kemoterapide dirençliliğin engellenebilmesi için geliştirilen yaklaşımlar, hastalığın farklı evrelerindeki değişken moleküler mekanizmaları göz önünde bulundurmalıdır.
Failure of chemotherapy in cancer patients because of development of drug resistance is a major problem. Alterations of DNA repair mechanisms and drug targets are among the important resistance mechanisms which are developed against topoisomerase II inhibitors etoposide and doxorubicin. Modifications in the expression levels of mismatch repair (MMR) genes due to resistance to topoisomerase II inhibitors are involved in breast cancer.In this study, etoposide resistant sublines were developed from MCF7 breast cancer cell line (MCF7/S) and the expression levels of TOP2A and two important MMR genes MSH2 and MLH1 were examined by real time qPCR. Previously developed doxorubicin resistant cells were also studied for comparison. Etoposide resistant sublines MCF7/1000E, MCF7/1250E and MCF7/2000E were approximately 2, 3 and 4 fold resistant relative to parental MCF7/S cells, respectively. MLH1, MSH2 and TOP2A expressions decreased in both etoposide and doxorubicin resistant sublines relative to MCF7/S cells. Expression levels of TOP2A in resistant sublines differ between 10-95 percent of the expression levels in the parental cells. In the sublines MCF7/200E, MCF7/500E, MCF7/750E and MCF7/1000E a decrease in TOP2A gene expression was determined. In sublines MCF7/1250E and MCF7/2000E fluctuations in the expression levels were observed. Among the doxorubicin resistant sublines (MCF7/600D and MCF7/1000D), in MCF7/1000D which is more resistant to doxorubicin, TOP2A expression level was higher. Expression levels of MSH2 decreased regularly as the resistance increased. However, in MCF7/1250E significant increase relative to MCF7/1000E was observed. In MCF7/2000E, expression levels of MSH2 again significantly decreased to 41 percent of the levels in parental cell line. Expression levels of MLH1 decreased significantly (18-58 percent) in etoposide resistant sublines relative to MCF7/S cells. In doxorubicin resistant sublines, a decrease in MLH1 gene expression was observed in MCF7/1000D.It can be concluded from the results that decrease in the expression levels of TOP2A, MSH2 and MLH1 genes may contribute to resistance together. Above a certain resistance level, sublines may develop new strategies for acquiring higher resistance. Whenever a strategy becomes limited, new strategies emerge. New approaches developed to overcome resistance in cancer chemotherapy should consider the molecular basis of resistance in different stages of the disease.